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仪器设备

凝胶色谱仪

凝胶色谱仪用于测定高分子物质的分子量分布,广泛应用于生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域。在造纸工业中,可用于测定纤维素和木素的分子量分布。

仪器编号:0400963购置日期:2002
放置地点:新实验楼五楼 502 管  理 人:李维英
仪器型号:Agilent 1100产      地:美国
仪器功能:凝胶色谱仪用于测定高分子物质的分子量分布,广泛应用于生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域。在造纸工业中,可用于测定纤维素和木素的分子量分布。
分子量范围:1000-300000,5-100μl进样量
操作规程
一、激活GPC数据分析

打开HP化学工作站并进入数据分析“Data Analysis”视窗。
1、调用要分析的数据文件,并对峰进行积分。
2、GPC菜单选择[activate GPC]选项。如果所调用的化学工作站方法包含有GPC数据分析部分,该选项就已被激活。
二、编辑GPC设置
打开“GPC Setting”设置将要进行的GPC数据分析和报告的方式:
1、GPC菜单中单击[GPC Setting…],然后根据您的需要编辑缺省GPC设置。
2、选择适当的校准文件(*.cal)和用于重新校准的检测器。
3、选择“Report Setting”,对于手工修改化学工作站积分,使用“GPC—ADDON”窗口中的“Interactive screen review”;对于在“Default printer”上的在线打印,使用“print results”,或者,对于在屏幕上显示打印结果,使用“print review”。此外,您可使用“Text Pile”复选框将数字结果直接转换成ASCII文件。文本文件(default.txt)将保存在化学工作站的数据文件子目录(*.d)中。
4、可在报告中包括“Result Subset as…”。对给定摩尔质量值选择重量分数“mass fraction at M [D]”,或者使用“molar mass at [M][%]”选项测定给定累积分布值的摩尔质量。
5、“Detector Configuration”部分,可以输入检测器间延迟值,以便在多个检测器配置的情况下自动校正色谱图设置。此外,可以通过单击颜色框并在弹出窗口中选择不同颜色来指定检测器或信号的颜色。
三、手工处理
1、HP化学工作站的调用一个用于GPC计算的文件。从GPC菜单选择[Calculate GPC Results],按照当前GPC设置开始色谱图的积分和GPC数据处理。
2、单击任务条上适当的图标以切换到“GPC--Addon”窗口,或者返回到化学工作站的数据分析“Data Analysis”视窗。
四、运行
1、激活化学工作站的数据分析“data Analysis”视窗,通过编辑GPC设置确保GPC设置是正确的,并保存化学工作站方法以包含GPC设置。
2、切换到化学工作站的方法和运行控制“Method and Run Control”视窗,并设置系统以合适的方法运行一个样品序列,确保要选择样品类型为“Sample”“Calibration”
3、GPC结果将按照GPC设置中设定的方式显示或在屏幕上,或打印出来。
五、创建一个新的校准曲线
1、按照运行序列所述分析一系列已知摩尔质量的窄标,作为未知样品。手工处理所需调用所需的数据文件。
2、然后从GPC菜单选择[GPC Setting…],确保已调用了default.cal文件,且GPC--设置对话框的“Report Settings”部分设定为“Interactive screen review”。完成之后选择OK按钮以返回到化学工作站的数据分析“data Analysis”视窗。从GPC菜单选择“Calculate GPC Results”以处理在化学工作站的数据分析“Data Analysis”视窗调用的数据。化学工作站对色谱图进行积分。单击“GPC—ADDON”图标以切换到“GPC—ADDON”窗口。
3、激活“Raw Data”窗口,并从[Editor]菜单选择[Sample]以打开样品编辑器。输入窄标的摩尔质量(或者对于校准标样的混合物输入多达4个摩尔质量),完成之后选择OK按钮。在“Raw Data”窗口可通过单击并拖动位于X轴上的红色三角来修改基线设置点,将红色三角拖到基线应当开始或终止的位置。从GPC数据分析菜单选择[Window] “calibration”,通过单击(File/New)来创建一个空的校准文件。校准窗口将改变背景颜色。
4、激活“E1ugram”窗口并在(第一个)峰下面和X轴下面移动鼠标。单击鼠标右键并从弹出命令框中选择“Find Maximum”,在“Add to Calibration”对话框中通过单击适当的比率按钮从列表中选择合适的校准标样摩尔质量。然后通过按“Add to Calibration”按钮将该校准点增加到校准表中。对该图上所有的标样继续上述操作。
5、然后从“Data Analysis”调用另一次窄标校准标样趵运行,并重复步骤1—5所述相同的方法进行处理,直到将所有校准标样增加到校准表中。
6、如果已完成了校准表,就激活“GPC—ADDON”窗口中的“Calibration”。为了创建一个校准曲线,从“Fit”下拉选择表中选择模式。从文件菜单中选择[Save as]对话框,并为该校准文件给定一个说明性名称,以保存该校准文件。
7、如果想用微分或偏差曲线重叠校准曲线,就从选择框中选择[Compare]。若有更好的拟合方式,就改变曲线拟合。选择[file/print]以打印出校准表和曲线图。
注意事项:所有流动相及样品需经0.22µm过滤膜过滤。